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解冻温度对农药残留的影响探究

  在实际工作中,制备好的样品常常被放置在-18℃的冰箱里保存,待用时,需出解冻。而放置在常温下解冻的样品,常需2~3h左右,影响工作效率,故本实验设置样品在不同温度下解冻,并对结果进行对比分析,探究解冻温度对结果是否会有影响。 
  1 实验部分 
  1.1 材料与仪器 
  供试农药标样农业部农药检定所供; 
  试剂正己烷(色谱纯)、丙酮(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、氯化钠(分析纯); 
  主仪器气相色谱仪(Agilent 789A)、氮吹仪、匀浆机等; 
  分析项目甲胺磷、甲拌磷、乐果、地虫硫磷、马拉硫磷、对硫磷、水胺硫磷、三唑酮、百菌清、氟虫腈、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、乙烯菌核利、腐霉利、异菌脲、联苯菊酯、氯氟氰菊酯、哒螨灵、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟胺氰菊酯; 
  标样浓度浓度均为1mg/L,配成32mg/L的混标溶液备用。 
  1.2 实验设计 
  实验分为3组,A组、B组、C组,每组为3个平行样,解冻温度分别为A组室温(2~25℃)、B组5℃、C组8℃。本次试验为确保结果的准确性,由同一人做3次的平行试验、及由3名不同的实验人员各做1次试验,最后的结果是由6次试验的平均数值得出。 
  1.2.1 试料制备 
  取黄瓜可食用部分,用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物,采用对角线分割法,将其切碎,充分混匀放入食品加工器粉碎,制成待测样,分别放入塑料容器中,编号,备用。 
  分别称取9份25.g的试料放入三角瓶中,各添加32mg/L的混标溶液.8L,摇匀封上封口膜后,放置冰箱中于-18℃保存,过夜。注意,有机磷类的农药对在ECD上出峰的时间与三唑酮有相重复的地方(具体见图1),故加标时,需分开。 
  第2天,取出,分别放置在室温(A组)、5℃的水浴锅(B组)、8℃的水浴锅(C组)中解冻。当解冻至9%左右时,可以取出,利用余温解冻完全。其中A组解冻时间为1h,B组解冻时间为.5h,C组解冻时间为.2h。 
  1.2.2 取 
  待完全解冻后,再分别加入5.mL乙腈,在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤,滤液收集到装有5~7g氯化钠的1mL具塞量筒中,收集滤液3~4mL,盖上塞子,剧烈震荡1min,在室温条件下静止3min,使乙腈和水相分层。 
  1.2.3 净化 
  有机磷类从1mL具塞量筒中吸取1.mL乙腈溶液,放入15mL烧杯中,将烧杯放在8℃水浴锅上加热,杯内缓缓通入氮气流,蒸发近干。加入2.mL丙酮溶解,完全转移至1mL刻度试管,定容至5.mL,摇匀待测。 
  有机氯、拟虫菊酯类从1mL具塞量筒中吸取1.mL乙腈溶液,放入15mL烧杯中,将烧杯放在8℃水浴锅上加热,杯内缓缓通入氮气流,蒸发近干,加入2.mL正己烷。将弗罗里硅土柱依次用5.mL丙酮和正己烷(1+9)、5.mL正己烷预淋洗,条件化,当溶剂液面到达柱吸附层表面时,立即倒入上述待净化溶液,用15mL刻度离心管接收洗脱液,用5mL丙酮+正己烷(1+9)冲洗烧杯后淋洗弗罗里硅土柱,并重复1次。将盛有淋洗液的离心管置于氮吹仪上,在水浴温度5℃条件下,氮吹蒸发至小于5mL,用正己烷定容至5.mL,在漩涡混合器上混匀,装入小瓶中,待测。 
  1.2.4 标准溶液的配制 
  有机磷、有机氯及拟虫菊酯类定量采用校准线外标法定量。准确移取65μL标样液于1mL容量瓶中,再分别配制成浓度为.28mg/L、.156mg/L、.14mg/L、.78mg/L、.52mg/L 的标样标准曲线。其中,有机磷标样用黄瓜基质配制。以标样进样浓度C(ug/L)为横坐标,对应单离子色谱峰面积A为纵坐标绘制标准曲线,相关系数R2 在(.9993~.9999)范围内,均呈现正相关系。 
  1.3 测定 
  1.3.1 上机测定参考条件 
  FPD检测器 
  色谱柱75%苯基-25%甲基聚硅氧烷(Agilent生产的 DB-17)柱,3m×32um×.25um; 
  进样口温度25℃ 检测器温度25℃; 
  柱温9℃-1min-1min;1℃/min-18℃-min-1min; 1℃/min -25℃-min-35min;1℃/min-255℃-1min-5min; 
  气体及流量氮气(6mL/min,纯度≥99.999%) 氢气(75mL/min,纯度≥99.999%) 标准空气(1mL/min); 
  进样方式自动进样 进样量1μL。 
  ECD检测器 
  色谱柱苯基甲基二甲基聚硅氧烷(Agilent生产的HP-5)柱,3m×32um×.25um; 
  进样口温度25℃;检测器温度3℃; 
  柱温9℃-1min-1min;3℃/min-17℃- 1min- 4.6667min;8℃/min-23℃-min-12.167min;2℃/min- 
  25℃-min-22.167min ;3℃/min- 275℃- 5min -35.5min;
  气体及流量氮气(3mL/min,纯度≥99.999%); 
  进样方式自动进样 进样量1μL。 
  1.3.2 色谱分析 
  分析吸取标准溶液和样品溶液1μL,以柱保留时间定性,以分析柱获得的样品溶液峰面积与标准溶液峰面积定量。每个平行样前后各进一针标准溶液进行计算,以减少偏差。 
  表1 有机磷不同解冻温度下的添加回收结果(×1-2) 
  编号 甲拌磷 甲胺磷 氧化 
  乐果 地虫 
  硫磷 马拉 
  硫磷 对硫磷 水胺 
  硫磷 乙酰 
  甲胺磷 乐果 甲基 
  对硫磷 毒死蜱 杀螟 
  硫磷 甲基 
  异柳磷 丙溴磷 
  空白/(mg/kg)  
  A-1/(mg/kg) 8. 9. 9.3 1.7 11.2 12.1 11. 6.2 7.1 8.9 8.9 8.8 9. 8.8 
  A-2/(mg/kg) 7. 9.5 9.7 1.7 11.4 11.3 11.6 7.4 7.6 8.9 8.9 8.2 9.4 7.9 
  A-3/(mg/kg) 8.2 9.5 9.8 11.1 1.4 1.7 11.1 7. 7.5 8.3 8.9 9.8 8.8 1.5 
  A/(mg/kg) 7.7 9.3 9.6 1.8 11. 11.3 11.2 6.9 7.4 8.7 8.9 8.9 9.1 9.1 
  编号 甲拌磷 甲胺磷 氧化 
  乐果 地虫 
  硫磷 马拉 
  硫磷 对硫磷 水胺 
  硫磷 乙酰 
  甲胺磷 乐果 甲基 
  对硫磷 毒死蜱 杀螟 
  硫磷 甲基 
  异柳磷 丙溴磷 
  RSD/% 8.3 6 3.1 2.1 4.8 6.2 2.9 8.9 3.6 3.7 9. 3.4 14.6 
  B-1/(mg/kg) 7.5 7.4 7.6 1.8 11. 1.7 1. 6.4 8.8 8.1 8.4 8. 8.8 9. 
  B-2/(mg/kg) 7.6 7.7 8.4 11.2 9.8 1.3 11. 6.8 8.9 7.8 8.7 8. 8.5 8.5 
  B-3/(mg/kg) 7.4 7.8 6.7 1.8 1.4 11.5 1.2 6.9 8.3 9.6 8.7 8.8 93 9.4 
  B/(mg/kg) 7.4 7.6 7.6 1.9 1.4 1.8 1.4 6.7 7.3 8.5 8.6 8.3 8.9 9. 
  RSD/% 2.8 2.8 11.2 2.1 5.8 5.6 5.1 3.9 11.2 11.3 2. 5.6 4.6 5 
  C-1/(mg/kg) 6.7 6.6 5.1 1.5 8.9 1. 11. 5.4 6.8 7.7 8.7 7.7 9.2 8.1 
  C-2/(mg/kg) 6.4 7. 5.5 1.4 9.5 1.5 9.4 6.8 7.1 9. 7.9 8.2 8. 7.6 
  C-3/(mg/kg) 6.7 6.4 6.1 1.2 9.4 1.2 9.9 6.4 7.4 8.3 9. 8.2 8.8 9.5 
  C/(mg/kg) 6.6 6.7 5.6 1.4 9.3 1.2 1.1 6.2 7.1 8.3 8.5 8. 8.7 8.4 
  RSD/% 2.5 4.6 9. 1.5 3.5 2.5 8.1 11.6 4.2 7.8 6.7 3.6 7. 11.7 
  表2 有机磷类农药三组结果的比较(×1-2) 
  序列 甲拌磷 甲胺磷 氧化 
  乐果 地虫 
  硫磷 马拉 
  硫磷 对硫磷 水胺 
  硫磷 乙酰 
  甲胺磷 乐果 甲基 
  对硫磷 毒死蜱 杀螟 
  硫磷 甲基 
  异柳磷 丙溴磷 
  A/(mg/kg) 7.7 9.3 9.6 1.8 11. 11.3 11.2 6.9 7.4 8.7 8.9 8.9 9.1 9.1 
  B/(mg/kg) 7.4 7.6 7.6 1.9 1.4 1.8 1.4 6.7 7.3 8.5 8.6 8.3 8.9 9. 
  C/(mg/kg) 6.6 6.7 5.6 1.4 9.3 1.2 1.1 6.2 7.1 8.3 8.5 8. 8.7 8.4 
  RSD/% 8 16.7 26.3 4. 8.4 3.9 5.4 4.4 5.5 2.1 1.1 5.4 2.1 4.3 
  表3 有机氯、拟虫菊酯类农药在不同解冻温度下的添加回收结果(×1-2) 
  序列 百菌清 三唑酮 甲氰 
  菊酯 氟虫腈 氯氰 
  菊酯 氰戊 
  菊酯 溴氰 
  菊酯 乙烯 
  菌核利 腐霉利 异菌脲 联苯 
  菊酯 氯氟 
  氰菊酯 哒螨灵 氟氯氰菊酯 氟氰戊菊酯 氟胺氰菊酯 
  空白/(mg/kg)  
  A-1/(mg/kg) 8. 8.4 1. 1.2 1. 1.6 1. 8. 8.4 8.9 9. 9.8 9. 9.9 1. 11.
  A-2/(mg/kg) 8. 8.5 11. 9.7 11. 1.3 1.5 8.6 7.8 8.6 8.2 9.8 8.8 9.6 1. 11. 
  A-3/(mg/kg) 8.6 9. 12. 9.5 1. 1.5 1.4 8.5 7.9 8.4 8.6 1. 8.9 9.8 1. 11. 
  A/(mg/kg) 8.2 8.6 11. 9.8 1.3 1.5 1.4 8.4 8. 8.6 8.6 9.9 8.9 9.8 1. 11. 
  RSD/% 4.2 3.7 9.1 3.7 5.6 1.5 2.6 3.8 4. 2.9 4.7 6. 1.1 1.6  
  B-1/(mg/kg) 7.2 8.6 1. 9. 1.1 1.5 1. 7.7 8.7 9.4 8.8 9.3 8.4 9.5 8.9 8.8 
  B-2/(mg/kg) 7.7 8.1 11. 7.2 1.3 1. 1.1 8.4 8.4 8.6 8.6 8.9 8.3 8.3 9.5 1. 
  B-3/(mg/kg) 7.8 8. 11. 7.8 1.4 9.8 9.9 8. 8.4 8.7 8.7 9.1 8.5 8.9 9.8 1. 
  B/(mg/kg) 7.6 8.2 1.7 8. 1.3 1.1 1. 8. 8.5 8.7 8.7 9.1 8.4 8.9 9.4 9.6 
  RSD/% 4.2 3.9 5.4 11.5 1.5 3.4 1. 4.4 2. 1.1 1.1 2.2 1.2 6.7 4.9 7.2 
  C-1/(mg/kg) 5.6 4.9 1.5 6.8 1. 1.2 9.9 8. 8.1 8.1 8.8 9.5 8.7 8.6 9.1 1. 
  C-2/(mg/kg) 5.8 4.2 1.2 7.2 1. 9.8 9.8 7.1 7. 8.7 7.9 8.2 7.9 8.6 7.9 9. 
  C-3/(mg/kg) 5. 4.9 1.4 5.8 1.3 9.9 1. 7.4 7.7 8.7 8.4 8.9 8.4 8.9 9. 1. 
  C/(mg/kg) 5.5 4.7 1.4 6.6 1.1 1. 9.9 7.5 7.6 8.5 8.3 8.8 8.3 8.7 7.7 9.7 
  RSD/% 7.6 8.7 1.5 1.9 1.7 2.1 1. 6.1 7.3 4.1 5.5 7.3 4.9 2. 7.7 6. 
  表4 有机氯、拟虫菊酯类农药三组结果的比较(×1-2) 
  序列 百菌清 三唑酮 氟虫腈 甲氰 
  菊酯 氯氰 
  菊酯 氰戊 
  菊酯 溴氰 
  菊酯 乙烯 
  菌核利 腐霉利 异菌脲 联苯 
  菊酯 氯氟氰菊酯 哒螨灵 氟氯氰菊酯 氟氰戊菊酯 氟胺氰菊酯 
  A/(mg/kg) 8.2 8.6 9.8 11. 1.3 1.5 1.4 8.4 8. 8.6 8.6 9.9 8.9 9.8 1. 11. 
  B/(mg/kg) 7.6 8.2 8. 1.7 1.3 1.1 1. 8. 8.5 8.7 8.7 9.1 8.4 8.9 9.4 9.6 
  C/(mg/kg) 5.3 4.7 6.6 1.4 1.1 1. 9.9 7.5 7.6 8.5 8.3 8.8 8.3 8.7 8.7 9.7 
  RSD/% 21.8 29.9 19.7 2.8 1.1 2.6 2.6 7.1 5.6 1.2 2.4 1.7 3.8 6.4 7.1 7.7 
  2 结果与分析 
  2.1 有机磷的结果分析 
  根据GB/T2744-28 《实验室质量控制规范 食品理化检测》,添加值在.1~1mg/kg时,平行样的RSD小于15%,则说明3个样的差异较小,结果可信。由此,可以认定3组值的RSD小于15%时说明解冻温度对其无影响,若大于15%时,则说明解冻温度对检测结果有影响。从表2可以看出,3组结果差异最小的是毒死蜱,相对标准偏差(RSD)为1.1%;差异最大的为氧化乐果,为26.3%。相对标准偏差超过15%的参数有甲胺磷、氧化乐果,说明解冻问题对其检测结果有影响。 
  2.2 有机氯、拟虫菊酯类的结果分析 
  从表4中可以看出,3组中结果差异最小的是氯氟氰菊酯,相对标准偏差为1.1%;差异最大的为三唑酮,相对标准偏差(RSD)为29.9%。相对标准偏差(RSD)超过15%的参数有百菌清、三唑酮、氟虫腈,说明解冻温度对其检测结果有影响;对其他参数则无明显影响。 
  2.3 影响的规律分析 
  通过表1、表3可以看出,对于被影响的参数(百菌清、三唑酮、氟虫腈、甲胺磷、氧化乐果),发现有一规律,3组回收率均小于1%且A组>B组>C组,即在8℃条件下解冻,回收率较低,最不好;5℃次之;常温下,回收率最高,结果最理想。 
  3 讨论 
  从上面数据中可以发现,解冻温度对有机磷、有机氯拟虫菊酯类的农药均有负向影响。所以在实际工作中不可仅仅为了高解冻速率,对样品直接加热。具体情况具体分析,如果仅测其他不受影响的参数,可以对样品进行适当加热;而所测的参数中有易受影响的参数,则不可对样品进行加热。主是因为,当温度升高时,有些熔沸点低的农药容易挥发,不稳定的农药极容易分解,导致回收率低。进一步可以推出,在前处理的取、蒸发步骤,水浴锅的温度可以调至低于标准中的“8℃”,有助于高农药的回收率。 
  参考文献 
  1 NY/T761-28蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟虫菊酯类和氨基甲酸酯类农药残留的测定S. 
  2 GB/T2744-28实验室质量控制规范 食品理化检测S.